Техника проведения бумажной хроматографии рисунки. ОФС.1.2.0002.15 Хроматография на бумаге. Камера для восходящей и нисходящей хроматографии

В настоящее время получили развитие следующие виды хроматографии на бумаге: одномерная, двумерная, круговая и электрофоретическая. Одномерную и двумерную выполняют в двух вариантах (рис. 6); восходящим и нисходящим потоком растворителя.

Рис.6

Одномерная восходящая хроматография. (рис. 6 а). 1-5 мкл исследуемого раствора капилляром наносит на полосу хроматографической бумаги в 2 см от нижнего края. Если неподвижная фаза - вода, то бумагу специально не обрабатывают, так как воздушно-сухая бумага содержит до 20 - 22% влаги. Подвижную фазу, насыщенную неподвижной, наливают на дно сосуда для хроматографирования (в цилиндр или пробирку).

Полосу бумаги нижним карем опускают в жидкость, а верхний край закрепляют так, чтобы бумага свободно свисала вниз, не касаясь стенок сосуда. Под действием капиллярных сил подвижная жидкость поднимается вверх по бумаге и разделяет компоненты смеси, которые при различных значениях Rf движутся по слою бумаги с неодинаковыми скоростями. Опыт считается законченным, когда фронт подвижной фазы почти достигнет верхнего края бумажной полосы. После этого хроматограмму извлекают из сосуда, отмечают линию фронта, высушивают и проявляют.

Ширина полосы обычно 2 - 5 см в случае нанесения одной пробы. Длина ее определяется условиями разделения. При одновременном хроматографировании ряда растворов берут широкую полосу бумаги; вдоль ее нижнего края проводят линию старта, на которую наносят капилляром исследуемые растворы на расстоянии 2--3 см друг от друга.

Одномерная нисходящая хроматография.

В верхней части цилиндра (см. рис. 6б.) укрепляют небольшую ванночку, в которую наливают подвижный растворитель, насыщенный неподвижным. На дно цилиндра помещают бюкс с неподвижным растворителем, насыщенным подвижным. Это создает в цилиндре атмосферу насыщенных паров, предотвращающих испарениерастворителя с бумаги.

На, полоску бумаги на расстоянии 5 см от верхнего края наносят каплю исследуемого раствора; край полоски погружают в ванну с подвижной фазой. Растворитель из ванны стекает под действием капиллярных сил и силы тяжести вниз по бумаге. Опыт считается законченным, когда фронт растворителя, достигнет 3-- 5 см от нижнего края бумаги.

Круговая хроматография . Для получения круговой хроматограммы в центр круга хроматографической бумаги вносят каплю исследуемого раствора. Работу удобно проводить в эксикаторе. Диаметр бумажного круга должен быть на 2--3 см больше диаметра нижней узкой чисти эксикатора. Круг укладывают над узкой частью эксикатора, в которую налита смесь неподвижного и подвижного растворителей. Для подачи растворителя в круге вырезают полоску от края круга до центра («фитиль»), отгибают ее вниз и опускают в растворитель. На полученной хроматограмме разделяемые вещества образуют концентрические круги.

Двумерная хроматография. Если одним растворителем разделить сложную смесь не удается, применяют последовательно два растворителя с разными коэффициентами распределения.

Для двумерной хроматографии применяют квадратные листы бумаги размером 20X 20, 30X30, 40X40 см. В начале опыта исследуемый раствор наносят на бумагу в ее левом углу на расстоянии 5 см от левого и от нижнего краев. После высушивания пятна бумагу помещают в сосуд для хроматографирования, опускают нижний край в один из выбранных растворителей и хроматографируют по восходящему методу. После высушивания бумагу, повернув на 90° против часовой стрелки, помещают в новый сосуд для хроматографирования, содержащий второй растворитель, и хроматографируют по восходящему методу. После проявления получают двумерную хроматограмму.

Бумага для хроматографирования. В распределительной хроматографии к бумаге предъявляются следующие требования: она должна быть химически чистой, химически и адсорбционно нейтральной, однородной по плотности, обеспечивать определенную скорость движения растворителя. В СССР выпускают четыре сорта хроматографической бумаги: № 1, 2, 3, 4. Каждый номер отличается от другого по плотности, а следовательно, и по скорости движения растворителя. Бумага № 1 и 2 называется «быстрой», а № 3 и 4 -- «медленной». Хроматографическая бумага должна содержать достаточное количество неподвижной фазы. Обычные сорта бумаги гидрофильны, поэтому в случае применения воды в качестве неподвижной фазы не требуется специально увлажнять бумагу.

Для разделения некоторых смесей нерастворимых в воде органических соединений целесообразно гидрофильную бумагу превратить в гидрофобную. Для этого бумагу ацетилируют, обрабатывая 10 г бумаги смесью 9 мл уксусного ангидрида, 100 мл петролейного эфира и 8--10 капель концентрированной серной кислоты. После ацетилирований бумагу пропитывают различными гидрофобными веществами (1%-ный раствор парафина в петролейном эфире, 0,5%-ный раствор каучука в бензоле и т. п.). Первостепенное значение для разделения смеси хроматографическим путем на бумаге имеет правильный выбор растворителей. В табл. 7 приведены подвижные фазы, наиболее часто применяемые в бумажной хроматографии для разделения смесей (неподвижная фаза -- вода).

Проявление бумажных хроматограмм . В большинстве случаев хроматограмма на бумаге после высушивания остается бесцветной. Поэтому полученные хроматограммы проявляют. Для этой цели служат растворы различных веществ, при взаимодействии которых с компонентами анализируемой смеси образуются окрашенные соединения. Качественно обнаружить вещества в проявленной хроматограмме можно и по люминесценции в ультрафиолетовом свете.

Для идентификации компонентов смеси на хроматограмме применяют метод «свидетелей». Этот метод основан на том, что коэффициент распределения Rf практически не зависит от присутствия посторонних веществ.

Хроматографический процесс, протекающий на листе фильтровальной бумаги при перемещении по ее капиллярам и поверхности подвижной фазы,

называется хроматографией на бумаге.

Неподвижной фазой является либо сама бумага, либо вещества, пред-

варительно нанесенные на ее волокна. Механизм хроматографии на бумаге может быть распределительным, адсорбционным или ионообменным. Пере-

мещение подвижной фазы происходит либо только под действием капилляр-

ных сил (восходящая хроматография), либо под действием капиллярных сил и силы тяжести (нисходящая хроматография).

При хроматографировании анализируемые вещества образуют на бу-

маге круглые или овальные пятна (зоны). Совокупность пятен, полученных при хроматографировании данного анализируемого образца, называется хро-

матограммой.

Подвижность вещества при хроматографировании характеризуется ве-

личиной R f , представляющей собой отношение расстояния от линии старта до центра пятна определяемого вещества к расстоянию от линии старта до линии фронта подвижной фазы (см. ОФС «Хроматография»).

Подлинность анализируемого вещества определяется при одновремен-

ном хроматографировании на одном листе бумаги анализируемого и стан-

дартного вещества. Если образцы идентичны, соответствующие им пятна на хроматограммах имеют одинаковый вид и равные значения R f . Для иденти-

фикации иногда целесообразно хроматографировать смесь равных количеств анализируемого и стандартного вещества. На хроматограмме должно набл ю-

даться одно пятно. Условия хроматографирования следует подбирать так,

чтобы значения R f были отличны от 0 и 1.

При испытаниях на чистоту примеси и основное вещество должны иметь разные значения R f . При этом можно судить о степени чистоты анали-

зируемого вещества по величине и интенсивности окраски (или поглощения)

обнаруживаемых на хроматограмме пятен примесей. Содержание примесей может быть определено полуколичественно. Для этого на одном листе бума-

ги одновременно хроматографируют определенное количество анализируе-

мого вещества и несколько образцов определяемой примеси (свидетеля) c

различными, точно известными концентрациями. Содержание примеси в анализируемом образце оценивают, сравнивая ее пятно на хроматограмме по совокупности площади пятна и интенсивности окраски (или поглощения) с

пятнами свидетеля. При достаточном сходстве пятен примеси по форме и ок-

раске с пятнами основного вещества, взятого в том же количестве, допуска-

ется использование соответствующих количеств основного вещества в каче-

стве свидетеля.

Для количественного анализа применяют спектрофотометрические или видеоденситометры. Для обработки хроматограмм в видимой области спе к-

тра целесообразно использовать планшетные сканеры и соответствующее программное обеспечение.

Можно также провести количественное определение веществ после их экстракции с хроматограммы. Для этого пятна вырезают и экстрагируют оп-

ределяемое вещество. Содержание анализируемого вещества в извлечении или сухом остатке после отгонки растворителя находят любым методом,

пригодным для определения малых концентраций.

ОБОРУДОВАНИЕ

Для проведения хроматографии на бумаге используют герметизиро-

ванные камеры, изготовленные из инертного материала и позволяющие на-

блюдать за ходом процесса разделения при закрытой крышке камеры. Часто в качестве камер используют стеклянные стаканы или цилиндры с пришли-

фованной крышкой и дополнительно герметизированные. На крышке могут быть входные отверстия (шлюзы) для добавления растворителя или снятия избыточного давления в камере.

При проведении нисходящей хроматографии в верхней части камеры помещают сосуд для подвижной фазы (лодочку). Лодочка должна вмещать объем подвижной фазы, достаточный для проведения, по крайней мере, од-

нократного хроматографирования. Длина лодочки должна превышать шири-

ну листа хроматографической бумаги. Камера должна быть снабжена уст-

ройствами для закрепления листа хроматографической бумаги в рабочем по-

ложении и для ввода в лодочку подвижной фазы.

При проведении восходящей хроматографии подвижную фазу поме-

щают либо в лодочку, установленную в нижней части камеры, либо налива-

ют на дно камеры.

Внутренние стенки камеры обкладывают фильтровальной бумагой, что способствует более быстрому и полному ее насыщению парами растворите-

лей, входящих в состав подвижной фазы.

Подготовку оборудования, хроматографической бумаги и подвижной фазы приводят в частных фармакопейных статьях.

1.2. ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ (ОФС 42-0094-09)

Хроматографический процесс в тонком слое сорбента, нанесенном на инертную твердую подложку (стеклянную, металлическую или полимер-

ную), называется тонкослойной хроматографией или хроматографией в тон-

ком слое сорбента (ТСХ).

Разделение может осуществляться по нескольким механизмам: адсорб-

ционному, распределительному, ион-парному, ионообменному, эксклюзион-

ному (гель-проникающему), хиральному или какой-либо их комбинации.

В результате движения анализируемого вещества и элюента под дейст-

вием капиллярных сил происходит разделение смеси исследуемых веществ на ее компоненты. При разделении вещества образуют на поверхности сор-

бента круглые или эллипсовидные пятна или полосы (хроматографические зоны).

Подвижность вещества при разделении характеризуется величиной R f

и R s (см. ОФС «Хроматография», уравнение 6 и рис. 1.4).

Параметры R f и R s используются для идентификации веществ и для оценки разделительной способности системы.

Испытание на подлинность (идентификация) анализируемых ве-

ществ проводится при одновременном хроматографировании одинакового количества анализируемого вещества и стандартного образца на одной и той же хроматограмме. При этом если вещества идентичны, то соответствующие им хроматографические зоны имеют одинаковую форму, интенсивность по-

глощения или окраски и равные величины R f .

При испытаниях на чистоту основное вещество и примеси в условиях хроматографирования должны иметь разные значения R f . При этом можно судить о степени чистоты анализируемого вещества по величине и интенсив-

ности пятен обнаруживаемых на хроматограмме примесей. Их содержание может быть определено полуколичественно. Для этого на пластинку наносят определенные количества анализируемого вещества и свидетелей. Для опре-

деления идентифицированных примесей в качестве свидетелей используют стандартные образцы идентифицированных примесей в количествах, соот-

ветствующих их предельному содержанию. Для определения неидентифици-

рованных примесей чаще всего используют растворы сравнения, приготов-

ленные путем разведения испытуемого раствора, как указано в частной фар-

макопейной статье. Содержание примеси в анализируемом веществе оцени-

вают, сравнивая зону примеси по совокупности величины и интенсивности с соответствующими пятнами свидетеля.

Количественное определение веществ на хроматограмме проводят,

как правило, денситометрически.

Основные приборы и материалы:

– пластинки с закрепленным слоем сорбента различных модификаций;

– хроматографические камеры;

– калиброванные капилляры и микрошприцы;

– устройства для нанесения на хроматограммы обнаруживающих реаген -

тов (пульверизаторы для опрыскивания, камеры для погружения хро-

матограмм в раствор и др.);

– вещества-стандарты, растворители, реагенты для обнаружения хрома-

тографических зон;

ультрахемископы с УФ-лампами на 254 нм и 365 нм.

Используемая лампа должна удовлетворять следующему тесту.

Проверка работы лампы. На пластинку силикагель G наносят 5 мкл

0,04 % раствора натрия салицилата в спирте 96 % для ламп с максимумом и з-

лучения при 254 нм или 5 мкл 0,2 % раствора натрия салицилата в спирте

96 % для ламп с максимумом излучения при 365 нм в виде пятна диаметром около 5 мм; пятно должно светиться.

При проведении анализов расстояние между лампой и хроматографи-

ческой пластинкой не должно превышать расстояния, используемого при проверке работы лампы.

Примечание. Используемый спирт должен быть свободен от флуоресцирующих веществ.

Хроматографические пластинки

Пластинка для ТСХ представляет собой твердую подложку (стеклян-

ную, металлическую или полимерную) с нанесенным слоем сорбента. Тол-

щина слоя сорбента от 0,1 до 0,25 мм для аналитического варианта и от 0,5

до 2,0 мм для препаративного.

Готовые хроматографические пластинки могут содержать флуоресци-

рующий индикатор для детектирования веществ, поглощающих в УФ-

области спектра при 254 и 365 нм.

Размер частиц сорбента для аналитического варианта ТСХ составляет

5–20 мкм. Наряду с такими пластинками можно использовать высокоэффек-

тивные хроматографические пластинки, содержащие сорбент с частицами размером 5–7 мкм. Такие пластинки позволяют увеличить эффективность разделения и уменьшить предел обнаружения хроматографических зон.

Выпускаются также пластинки с монолитными сорбентами и пластин-

ки с концентрирующей зоной (двухфазовые пластинки). Последние исполь-

зуются в фармацевтическом анализе для разделения сложных и гетерогенных смесей (экстракты из растительного лекарственного сырья, растворы табле-

ток со вспомогательными компонентами, мягкие лекарственные формы, сме-

Хроматографические камеры

Используют хроматографические камеры для вертикального или гори-

зонтального элюирования с герметичными крышками. Камеры для горизон-

тального элюирования снабжены также устройствами для подачи элюента на пластинку. Перед проведением анализа обычно внутренние стенки камеры обкладывают фильтровальной бумагой, смоченной подвижной фазой. Для вертикального элюирования применяют камеры с перегородкой в центре дна.

Использование камеры для горизонтального элюирования позволяет осуществлять одновременное элюирование с противоположных сторон пла-

стинки, что увеличивает производительность анализа в два раза по сравне-

нию с использованием камеры для вертикального элюирования. При этом также уменьшается расход подвижной фазы приблизительно в 10 раз. В го-

ризонтальной камере движение подвижной фазы по пластинке происходит только за счет капиллярных сил, вклад гравитации при этом отсутствует, что повышает эффективность разделения по сравнению с камерами для верти-

кального элюирования.

Подвижные фазы (ПФ)

Подвижные фазы (элюенты) должны быть предпочтительно малоток-

ции ни с сорбентом (НФ, неподвижной фазой), ни с компонентами разделяе-

мой смеси. ПФ должны также достаточно быстро испаряться с поверхности хроматограмм после элюирования.

Для подавления диссоциации полярных молекул компонентов разде-

ляемой смеси к ПФ добавляют вещества кислого или основного характера

(модификаторы).

Нанесение проб

Если это указано в частных фармакопейных статьях, пластинки предва-

рительно промывают растворителем и активируют нагреванием в течение 1 ч

при 100–105 С в сушильном шкафу. Перед нанесением проб пластинки должны храниться в герметично закрытом эксикаторе. Нанесение проб осу-

ществляют:

– калиброванными капиллярами с тупым концом;

– поршневыми микрошприцами с тупым концом иглы;

– полуавтоматическими или автоматическими аппликаторами.

Нанесение осуществляют двумя способами: в виде пятен (2–5 мм диа-

метром) с промежутками между пятнами не менее 10 мм и в виде полос дли-

ной от 10 до 20 мм с промежутком между ними не менее 10 мм. Расстояние линии старта от нижнего края пластинки должно составлять не менее 10 мм.

Во избежание «краевых эффектов» размывания фронта ПФ в процессе элюи-

рования перед нанесением проб соскабливают с обеих боковых сторон пла-

стинки слой сорбента шириной 2–3 мм. Расстояния на стартовой линии от боковых краев пластинки до мест нанесения первой и последней проб долж-

ны составлять не менее 10 мм. В процессе нанесения проб недопустимо по-

вреждение сорбента на линии старта. Подсушивание нанесенных проб осу-

ществляют в токе холодного или теплого воздуха, либо на специальном столе с электроподогревом.

Способы элюирования

Используют следующие способы элюирования: восходящее элюирова-

ние (одно- и многоступенчатое, одномерное и двумерное – с поворотом пла-

стинки на 90 или 180) и горизонтальное.

Восходящая хроматография

Если не указано иначе в частной фармакопейной статье, пластинку с нанесенными пробами помещают вертикально в камеру, предварительно на-

сыщенную парами ПФ в течение 1 ч при 20–25 С. Уровень ПФ должен быть расположен ниже линии старта. Камеру закрывают и проводят процесс при

20–25 С в защищенном от света месте. После прохождения фронта ПФ рас-

стояния, указанного в частной фармакопейной статье, пластинку вынимают из камеры, сушат и проявляют в предписанных условиях.

При проведении двумерной хроматографии пластинку высушивают после хроматографирования в первом направлении и хроматографируют в направлении, перпендикулярном первому.

Горизонтальная хроматография

Пластинку с нанесенными пробами помещают в камеру и направляют по-

ток ПФ из лотка в камеру согласно инструкции к прибору для горизонтального элюирования. Процесс проводят при 20–25 С (если это указано в частной фар-

макопейной статье, одновременно с противоположных сторон пластинки). Ко-

гда ПФ пройдет расстояние, указанное в частной фармакопейной статье, пла-

стинку вынимают, сушат и проявляют в предписанных условиях.

Двумерную хроматографию выполняют как указано в разделе «Восхо-

дящая хроматография».

Способы обнаружения

Обнаружение (детектирование) хроматографических зон после прове-

дения качественной и полуколичественной ТСХ осуществляют следующими способами:

– наблюдением под УФ-светом;

– опрыскиванием растворами обнаруживающих реагентов;

– выдерживанием в парах обнаруживающего реагента;

– погружением в растворы обнаруживающих реагентов в специальных камерах.

Высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ)

Эффективность разделения увеличивается как вследствие увеличения площади раздела подвижной и неподвижной фазы за счет уменьшения диа-

метра частиц сорбента, так и благодаря большей однородности размеров этих частиц. Применяют ВЭТСХ-пластинки, выполненные как в нормально-

фазовом (полярная НФ), так и в обращенно-фазовом (неполярная НФ) вари-

По сравнению с классической ТСХ использование высокоэффективных пластинок позволяет:

– увеличить число анализируемых проб за счет уменьшения диаметра стартовых пятен (до 1–2 мм) или длины полос (до 5–10 мм);

– уменьшить промежутки между стартовыми пятнами (до 5 мм);

– уменьшить время хроматографирования за счет уменьшения пробега фронта подвижной фазы (ПФ);

– уменьшить расход (объем) ПФ;

– снизить пределы обнаружения пятен и количественного определения определяемых веществ в 10–100 раз.

Применение ВЭТСХ обеспечивает получение более компактных пятен разделяемых соединений, что улучшает метрологические характеристики коли-

чественного определения с помощью сканирующей хроматоденситометрии.

При бумажной хроматографии неподвижной жидкой фазой служит вода, адсорбируемая волокнами бумаги в количестве до 20%, ил другой полярный растворитель; в качестве подвижной фазы чаще всего применяют бутиловый спирт, коллидин, фенол, крезолы. Носителем служит хорошая фильтрованная бумага, достаточно однородная по толщине и плотности.

Для разделения смеси способом бумажной хроматографии каплю исследуемого раствора наносят на полоску фильтрованной бумаги шириной 15-20 мм и длиной 300-500 мм на расстоянии 20-30 мм от конца. Конец полоски погружают в соответствующий органический растворитель, предварительно насыщенной водой, а весь прибор помещают в герметическую камеру, атмосфера в которой насыщена парами органического растворителя и воды. Движение растворителя вдоль полоски бумаги, происходящее вследствие капиллярных сил, обеспечивает проявление хроматограммы, причем отдельные зоны перемещаются с различной скоростью.

Двумерная хроматография на бумаге

Еще более точные результаты получаются при помощи так называемой двухмерной хроматографии на бумаге. Для этого варианта применяют не полоски фильтрованной бумаги, а прямоугольники размером примерно 400Х500 мм. Каплю исследуемого раствора наносят вблизи одной из вершин прямоугольника, а Хроматограмму проявляют дважды различными растворителями, например фенолом и коллидином, сперва одним растворителем, а затем, после поворота на 90?, -другим.

Методы проявления хроматограмм

Восходящая хроматография. Бумага погружается нижним концом в подвижную фазу. Подъём жидкости происходит под действием капиллярных сил.

«+» Прибор прост, возможна количественная оценка результатов;

«-» Сила тяжести и капиллярные силы действуют в противоположных направлениях; скорость всасывания после подъема до 20 см сильно падает. Применима для веществ, имеющих достаточно большие различия в значениях Rf

Нисходящая хроматография. Бумага погружается в подвижную фазу верхним концом. Стекание жидкости происходит под действием силы тяжести.

«+» - быстрое прохождение подвижной фазы; отсутствие ограничения длины пробега пятен (проточная хроматограмма); возможно разделение веществ с незначительно отличающимися значениями Rf и количественная оценка результатов.

«-» - Прибор сложнее, чем для восходящей хроматографии.

Рис. 5.

Радиально-горизонтальная хроматография. Подвижная фаза непрерывно наносится в центр круглого листа бумаги.

«+» - Быстрое выполнение, зоны узки и резко очерчены; большая полнота разделения, чем для первых методов.

«-» - Возможна только качественная оценка результатов; применение «свидетелей» возможно только лишь при так называемом «секретном методе» (т.е. при делении бумаги на секторы).

Приготовление подвижной фазы

Ниже описан простейший случай хроматографии на бумаге - восходящая хроматография с водой в качестве восходящей фазы.

Компоненты выбранной системы растворителей смешивают в указанном соотношении в делительной воронке. Две несмешивающиеся фазы доводят при помощи встряхивания до взаимного насыщения; в качестве подвижной фазы выступает органическая.

Нанесение вещества

Из бумаги определенного сорта вырезают полоску, размер которой соответствует размерам применяемого для хроматографии цилиндра. На расстоянии 3 см от нижнего края карандашом наносят маркировочную линию. На этой линии через 2 - 2,5 см друг от друга и от краев полоски помечают точки старта. Специальной пипеткой наносят каждую точку старта; при этом образуются пятна около 1 см в диаметре. Затем растворителю дают испариться.

тонкослойный хроматография растворитель бумага

Проявление

На дно цилиндра наливают подвижную фазу и подвешивают полоску бумаги. Оставляют ее так висеть в течение ночи, а затем нижний край полоски погружают на 0,5 см в подвижную фазу. После того как растворитель поднимется на 20 - 25 см, полоску вынимают, отмечают карандашом положение фронта растворителя и Хроматограмму высушивают.

Международный Фестиваль «Звезды Нового Века» - 2013

Естественные науки (от 14 до 17 лет)

Ученический проект

Хроматография

Выполнила: ученица7а класса

БлохинаТатьяна

Проверила: учитель химии

Волховский районный химический клуб

МОБУ «Волховская СОШ№1»

г. Волхов

1. Введение…………………………………………………..стр3

2. Цель, методы, вопросы проекта…………………………стр4

3. и открытие хроматографии. …………………..стр5

4. Хроматография. Методы хроматографии…………………стр.8

5. Экспериментальная часть………………………………..стр.13

6. Применение хроматографии…………………………….стр.

7. Литература…………………………………………………стр.

Цель: Изучить суть одного из самых используемых методов химического анализа - хроматографии, провести эксперименты, которые возможно осуществить в школьных условиях.

Проблемные вопросы проекта :

· Что такое хроматография?

· Какие виды хроматографии существуют?

· Какие из них можно использовать в школьных условиях?

· Какие вещества можно выделить из смеси с помощью хроматографии?

· Можно ли обнаружить вещества, не имеющие окраски?

· Какие из доступных хроматографических методов более совершенны?

Этапы проекта

1. Сбор информации по теме проекта

2. Проведение эксперимента

3. Составление тезисов и создание презентации

1.Введение

Хроматография - один из самых распространенных методов химического анализа во всех лабораториях мира. Создатель метода - - будучи ботаником, назван среди ста величайших химиков всех времен и народов именно за создание метода.

Биологическая хиимя" href="/text/category/biologicheskaya_hiimya/" rel="bookmark">биохимик растений. Создал храмотагрофический метод. Исследовал пигменты листьев растений, получил в чистом виде хлорофиллы a, b и c и ряд изомеров ксантофилла. Открытие Цвета получило широкое применение и признание с начала 1930-ых годов при разделении и идентификации различных пигментов, витаминов , ферментов, гормонов и других органических и неорганических соединений и послужило основой для создания ряда новых направлений аналитической химии (газовая хроматография, жидкостная хроматография, тонкослойная хроматография).

Даже фамилия ему досталась биологическая - Цвет… Ведь у растений цветы - квинтэссенция их бытия , надежда на вечную жизнь. А может, в фамилии отразился не какой-то конкретный цвет сирени или ольхи, а оттенок, окраска, цвет неба или травы.
Свое имя он как будто зашифровал в названии своего главного открытия. Слово «хроматография» образовано из двух греческих корней: «хроматос» - цвет, окраска и «графия» - запись.
Михаил Семенович родился 14 мая 1872 года в интернациональной семье русского и итальянки. Как говорили, этот брак был заключен по большой любви.
Образование он получил в Швейцарии, в Женевском университете. Там же в 1896 году Цвет защитил диссертацию на степень доктора естественных наук.
Михаил Семенович в совершенстве владел немецким, французским, итальянским и английским языками . В 1897 году он переехал на историческую родину отца, в Россию.
Некоторое время доктор Цвет работает в Петербургской биологической лаборатории, основанной П. Лесгафтом. Но счастливым городом для него стала Варшава, куда ученый переехал в 1902 году. В том же году Цвет защитил магистерскую диссертацию на тему «Физико-химическое строение хлорофилльного зерна» и получил должность доцента.
Цвет был первым, кому удалось установить, что существуют только две модификации (видоизменения) хлорофилла: хлорофилл А и хлорофилл В. Произошло это в 1903 году. До этого в науке считалось, что в каждом растении содержится свой вид хлорофилла: березовый, лишайниковый, фиалковый и т. д. Цвет сузил поиск хлорофиллов до двух форм. И сделал он это с помощью изобретенного им самим метода.

Этот метод был принципиально нов, прост и сложен одновременно. Профессор насыпал в стеклянную трубку тонко измельченный порошок очищенного мела, смочил его бензолом и налил сверху немного раствора хлорофилла. Верхний слой мела при этом окрасился в ярко-зеленый цвет. После этого исследователь осторожно, по каплям начал добавлять растворитель - бензол. Зеленое колечко вслед за растворителем стало постепенно опускаться вниз по трубке. И тут (о, чудо!) Михаил Семенович заметил, что широкое колечко разделилось на несколько узких. Появилась желтая полоса, она двигалась медленнее других и потому расположилась выше них. Под ней последовательно шли желто-зеленая и зелено-синяя полоски, потом еще две желтые разной ширины и ниже всех- светло-желтая. Путем тщательного анализа исследователь определил, что над самой верхней полоской расположена еще одна, бесцветная.

Рис. 1. Хроматографическое разделение

пигментов зеленого листа, полученное

в опыте Цвета.

Так сложное вещество оказалось разделенным на компоненты, подобно тому, как световые лучи разлагаются на спектр.
Как уже говорилось, новый метод разделения сложных веществ на компоненты был назван хроматографией. Название сохранилось, хотя цвет в современных хроматографических методиках перестал играть какую-либо роль.
Что же лежит в основе этого метода? Раствор вытяжки из листьев соприкасается с порошком мела и обесцвечивается, окрашивая мел (сорбент). На поверхности частиц сорбента осаждаются все соединения, входящие в состав смеси. Они могут переходить обратно в раствор (элюент) и снова сорбироваться на поверхности порошка мела. Процессы осаждения - растворения (сорбции - десорбции) за время движения «колечка» в колонне происходят многократно.
Между раствором (в бензоле, как, например, у Цвета) и сорбентом (мелом) устанавливается наконец равновесие: на поверхности частиц оказывается львиная доля молекул растворенного вещества, а в растворе их почти не остается.
Тайну хроматографии раскрывают именно те немногие молекулы, которые увлекаются вниз по трубке вместе с потоком растворителя. По пути они медленно вновь осаждаются на другие частицы мела, а вместо них в раствор переходят новые молекулы. Поток растворителя непрерывно поступает сверху в трубку. В верхней части постепенно становится все меньше сорбированных веществ, а в нижней - все больше.
Весь фокус в том, что молекулы с разным строением или составом по-разному сорбируются на поверхности сорбента. Одни из них сильнее прикрепляются к мелу, другие - слабее. Одни дольше находятся в растворе и меньше в связанном состоянии, а другие - наоборот. Те молекулы, которые дольше задерживаются в растворе, склонны быстрее опускаться вниз по колонке. Постепенно окрашенная смесь разных веществ разделяется на составные части. Каждое вещество сосредоточивается в своем слое. Если колонка (трубка) достаточной длины, то компоненты смеси довольно далеко отходят друг от друга. Каждое цветное кольцо соответствует определенному компоненту. А их расположение относительно друг друга образует хроматограмму, исследуя которую химики-аналитики могут определить состав вещества. А такая вертикальная хроматография получила устойчивый эпитет «колоночная».
С помощью колоночной хроматографии можно не только определять качественный состав смеси веществ, но и разделять ее на компоненты, по очереди вымывая «колечки» растворителем в отдельную посуду. Метод пригоден также для сверхтонкой очистки вещества.
Сделав свое открытие, Михаил Семенович идет дальше, расширяя область исследований. В. период с 1908 по 1910 год он преподает ботанику в Варшавском политехническом институте и одновременно продолжает изучение зеленого пигмента растений. В 1910 году Цвет защищает диссертацию на степень доктора ботаники. Тема исследования следующая: «Хлорофиллы в растительном и животном мире». Конечно же, проводя эксперименты, Михаил Семенович применял свой могущественный метод, но только в качестве инструмента, средства, а не цели. Он так и не дождался признания. И никогда не узнал, что его гениальному изобретению будут обязаны своими открытиями не менее шести лауреатов Нобелевской премии.
С 1917 года профессор Цвет преподает в Юрьевском (ныне Тартусском) университете. Но в 1918 году война и лишения заставляют Михаила Семеновича податься в более хлебные места. Таковым он посчитал город Воронеж. В должности профессора Воронежского университета он провел последний год своей жизни.
26 июня 1919 года ученый умер от голода и болезней, как умирали многие русские люди во время гражданской войны.
Метод Михаила Семеновича Цвета широко применяется во многих областях науки и техники. Появилась газожидкостная, бумажная, ионообменная хроматография, хроматография в тонком слое.
С помощью ионообменной хроматографии можно избавить воду от жесткости или опреснить ее. Она же помогла разделить смесь изотопов редкоземельных элементов. Радиоактивность каждой капли раствора, вытекающего из ионообменной колонны, определяется отдельно. Оказалось, что чем выше порядковый номер элемента в таблице Менделеева, тем быстрее он выходит из колонны при хроматографическом разделении. Чередование элементов удивительным образом соответствует их взаимному положению в Периодической системе: америций (95), за ним - кюрий (96), берклий и, наконец, калифорний (98).
Так метод Цвета принял участие в глобальных атомных проектах XX века.
В 1992 году на скромной могиле ученого в Воронеже было установлено надгробие с эпитафией: «Ему было дано открыть хроматографию, разделяющую молекулы, объединяющую людей».

ХРОМАТОГРАФИЯ

Хроматографией называется экспериментальный метод разделения компонентов смеси между стационарной (неподвижной) фазой и подвижной фазой*. По характеру стационарной фазы хроматография подразделяется на два типа - адсорбционную и распределительную.

В адсорбционной хроматографии стационарной фазой является твердое вещество. Это твердое вещество адсорбирует порцию каждого компонента из смеси.

Адсорбция вещества происходит в том случае, когда оно поглощается поверхностью другого вещества. Адсорбцию не следует путать с абсорбцией , которая происходит, когда одно вещество диффундирует в объеме другого вещества и поглощается всем объемом, а не поверхностью этого второго вещества (рис. 6.40).

В распределительной хроматографии стационарной фазой является жидкость. Компоненты смеси распределяются между этой жидкостью и подвижной фазой.

Принцип хроматографического разделения заключается в том, что подвижная фаза непрерывно перемещается над стационарной фазой, и по мере этого под влиянием стационарной фазы происходит разделение компонентов смеси на ней.

Оба этих основных метода хроматографии включают две главные стадии: 1) распределение компонентов смеси между двумя фазами; 2) разделение компонентов смеси на стационарной фазе или в ней непрерывным потоком подвижной фазы.

Тот компонент смеси, который имеет больший коэффициент распределения D, остается преимущественно растворенным в подвижной фазе и, следовательно, быстро перемещается над стационарной фазой. Компонент с меньшим коэффициентом распределения D остается преимущественно адсорбированным на твердой стационарной фазе или абсорбированным в жидкой стационарной фазе. По мере перемещения подвижной фазы над стационарной фазой этот компонент медленно передвигается вдоль стационарной фазы.

Хроматография играет особо важную роль в органическом синтезе при разделении и выделении компонентов смеси. Она используется в количественном и качественном анализе для идентификации разделенных компонентов смеси, а также для определения частоты анализируемого вещества.

Термин «хроматография» не вскрывает сути обсуждаемой методики разделения смесей. Слово хроматография по-гречески означает цветопись. Дело в том, что первые хроматографические методики применялись для разделения смесей окрашенных веществ.

Различают основные пять методов хроматографического анализа:

1. Адсорбционный

2. Распределительный

3. Ионообменный

4. Осадочный

5. Эксклюзионный

I. Адсорбционная хроматография основана на избирательной адсорбции отдельных компонентов анализируемой смеси соответствующими адсорбентами. При работе этим методом анализируемый раствор пропускают через колонку, заполненную мелкими зернами адсорбента. Применяют адсорбционную хроматографию для разделения неэлектролитов, паров и газов.

II. Распределительная хроматография основана на использовании различия коэффициентов сорбируемости отдельных компонентов анализируемой смеси между двумя несмешивающимися жидкостями. Одна из жидкостей (неподвижная) находится в порах пористого вещества (носителя), а вторая (подвижная) представляет собой другой растворитель, не смешивающийся с первым. Этот растворитель пропускают через колонку с небольшой скоростью. Различные величины коэффициентов распределения обеспечивают неодинаковую скорость движения и разделения компонентов смеси. Коэффициент распределения вещества между двумя несмешивающимися растворителями есть отношение концентрации вещества в подвижном растворителе к концентрации того же вещества в неподвижном растворителе: (К = Сподв/Снеподв).

Иногда в качестве носителя для неподвижного растворителя вместо колонки используют полоски или листы фильтровальной бумаги, не содержащей минеральных примесей. В этом случае каплю испытуемого раствора наносят на край полоски бумаги, которую подвешивают в закрытой камере, опустив ее край с нанесенной на нее каплей испытуемого раствора в сосуд подвижным растворителем (движителем), который, перемещаясь по бумаге, смачивает ее. При этом каждое содержащееся в анализируемой смеси вещество перемещается с присущей ему скоростью в том же направлении, что и движитель. Такой вид распределительной хроматографии называют бумажной хроматографией.

Особым видом распределительной хроматографии является газожидкостная хроматография (ГЖК). В качестве неподвижной фазы используют различные нелетучие жидкости, нанесенные на инертный твердый носитель; в качестве подвижной фазы - газообразные азот , водород , гелий, двуокись углерода и др. Разделение смесей методом ГЖК осуществляется в колонках, представляющих собой трубки с внутренним диаметром 1 - 6 мм и длиной 1 - 5 м, заполненные инертным носителем, например диатомитом, пропитанным нелетучей жидкостью, или стальные и стеклянные капилляры диаметром 0,2 - 0,3 мм и длинойм с жидкой фазой, нанесенной на стенки этих капилляров (капиллярная газожидкостная хроматография).

Так как многие органические соединения, например биополимеры, перевести в газовую фазу затруднительно или вообще невозможно, то для таких веществ применяется жидкостная хроматография высокого давления (молекулярная жидкостная хроматография). В качестве неподвижной фазы применяются мелкопористые инертные носители, покрытые пленкой различных полимеров, нерастворимых в органических растворителях. Заполнение колонок (диаметром 0,мм) неподвижной фазой проводят под давлением в атм., благодаря чему добиваются высокой однородности и плотности заполнения и, следовательно, эффективности разделения. Элюирование разделяемых веществ осуществляется пропусканием через колонку какого-либо подходящего органического растворителя или их смеси под давлением ватм.

III. Ионообменная хроматография основана на использовании ионообменных процессов, протекающих между подвижными ионами адсорбента и ионами электролита при пропускании раствора анализируемого вещества через колонку, заполненную ионообменным веществом (ионитом). Иониты представляют собой нерастворимые неорганические и органические высокомолекулярные соединения, содержащие активные (ионогенные) группы. Подвижные ионы этих групп способны при контакте с растворами электролитов обмениваться на катионы или анионы растворенного вещества. В качестве ионитов применяют окись алюминия (для хроматографии), пермутин, сульфоуголь и разнообразные ионообменные вещества - ионообменные смолы. Иониты делят на катиониты, способные к катионному обмену (содержат активные группы: - SO3H, - COOH, - OH); аниониты, способные к анионному обмену (активные группы: - NH2, =NH); амфолиты – ионообменные вещества, обладающие амфотерными свойствами.

Фрагмент катионита: Катионный обмен: RH + KtAn = RKt + Han

Фрагмент анионита: Анионный обмен: ROH + HAn = RAn + H2O

IV. Осадочная хроматография основана на различной растворимости осадков, образуемых различными компонентами анализируемой смеси со специальными реактивами, нанесенными на высокодисперсное вещество. Анализируемые растворы пропускают через колонку, заполненную пористым веществом (носителем). Носитель пропитан реактивом-осадителем, который образует с ионами раствора осадки, имеющие различную растворимость. Образовавшиеся осадки в зависимости от растворимости располагаются в определенной последовательности по высоте колонки.

V. Эксклюзионная (молекулярно-ситовая) хроматография основана на разной проницаемости молекул компонентов в неподвижную фазу (высокопористый неионогенный гель). Эксклюзионная хроматография подразделяется на гельпроникающую (ГПХ), в которой элюент – неводный растворитель, и гель-фильтрацию, где элюент – вода.

Экспериментальная часть

(Бумажная хроматография, колоночная хроматография, тонкослойная хроматография)

1. Хроматография на бумаге

Разделите методом хроматографии на бумаге следующие смеси:

А) зеленый фломастер

Б) синий фломастер.

Цель эксперимента: освоить метод бумажной хроматографии, научиться определять разницу между чистыми веществами и смесями.

Оборудование : стаканчик с водой, полоска фильтровальной бумаги (10 см х 2 см), зелёный фломастер. На расстоянии 2 см от конца полоски проводится фломастером горизонтальная линия (параллельно меньшей стороне). Необходимо опустить этот конец в воду, чтобы нарисованная линия была над поверхностью воды. Наблюдаем, как намокает бумажная полоска, вода поднимается по ней вверх, доходит до нарисованной линии и увлекает краску с собой.

А далее мы увидим, как зелёная линия расплывается и оказывается двухцветной вверху – голубой цвет, ниже – зедёный. Данный опыт позволил определить, что зелёная краска фломастера на самом деле состоит из двух красок.

Синий цвет также разделился.

Замечание: использовать фломастеры с чернилами на водорастворимой основе (не маркеры для подписи дисков), не использовать туалетную бумагу – поднятие воды происходит слишком быстро, и картина получается размытая. Можно попробовать бумажное полотенце. Если нет фильтровальной бумаги, можно отрезать поля у газеты (только время затрачивается на наблюдение больше).

2.Изготовление хроматографической колонки

В качестве хроматографической колонки используем стеклянные трубки диаметром 6=8 мм и длиной 12-15см.

С одного краяв трубку помещаемнебольшой ватный тампон. Колонку наполовину заполняем сухим сорбентом – оксидом алюминия. Порошок сорбента уплотняем. Колонку закрепляем в лапке штатива.

О пыт. Разделение смеси катионов в хроматографической колонке

Берем растворы хлорида железа (III), сульфата меди(II), хлорида кобальта(II). Окраска этих растворов: желтая, голубая, розовая. Наливаем в стакан по 10 капель каждого рас­твора и перемешиваем стеклянной палочкой. Набираем пипеткой 1 мл смеси и медленно, по каплям выливаем её в хроматографическую колонку. Каждую порцию жидкости вносим только после того, как впитается предыдущая. Через некоторое время в колонке появляются цветные кольца адсорбированных ионов. Для более чёткого распределения цветных колец добавим в хроматографическую колонку 3-4 капли воды. По окраске зон определим расположение катионов в колонке с сорбен­том.

https://pandia.ru/text/78/355/images/image011_20.jpg" align="left" width="227" height="303 src=">

Полученная хроматограм му - так называют результат проведённой хроматографии - и указывает распределение катионов.

Таким образом, хроматография позволяет достаточно быстро разделить смесь, состоя­щую из близких по свойствам компонентов.

Для проведения хроматографии в качестве сорбентов можно использовать не только оксид алюминия, но и другие вещества, на­пример оксид магния, крахмал, карбонат кальция. Последний - основной компонент скорлупы куриного яйца.

Опыт Разделение смеси катионов на скорлупе куриного яйца

Возьмём половинку скорлупы куриного яйца, предварительно очищенную от плёнки. Ватной палочкой, смоченной в этиловом спирте, протрём её внутреннюю поверх­ность. Возьмём приготовленную для преды­дущего опыта смесь растворов трёх солей (FeCl3, CuS04, СоС12). Нанесём одну каплю смеси на внутреннюю сторону скорлупы. Когда жидкость впитается, на то же место нанесём ещё одну каплю этой смеси. После впитывания жидкости добавим в центр пят­на одну каплю воды. Фотографируем полученную хроматограмму.

Сравним расположение цветных зон на скорлупе с результатом предыдущего опыта. Обращает внимание сходство в последова­тельности расположения цветных зон. Это объясняется тем, что разные ионы адсорби­руются по-разному: одни сильнее, другие сла­бее. От этого зависит скорость их продвиже­ния по сорбенту. Если расположить катионы, находящиеся в анализируемой смеси, в по­рядке уменьшения их адсорбционной способ­ности, получим следующий ряд:

Fe3+ → Cu2+ → Co2+

https://pandia.ru/text/78/355/images/image013_19.jpg" align="left" width="144" height="162 src=">В лабораториях вместо яичной скорлупы применяют специальные пластинки из стек­ла, алюминия или пластмассы. На них пред­варительно наносят тонкий слой сорбента, поэтому такую хроматографию называют тонкослойной. Данный метод хроматографи-рования был предложен советским учёным в 1938 г.

https://pandia.ru/text/78/355/images/image015_17.jpg" align="left hspace=12" width="181" height="175">

https://pandia.ru/text/78/355/images/image017_11.jpg" align="left" width="158" height="158 src=">.jpg" align="left" width="154" height="163 src=">

Опыт «Разделение пятна от фломастера на бумаге»

Нам понадобится кружок фильтровальной бумаги. В центре круга сделаем жирную точ­ку чёрным фломастером (можно использо­вать тот же фломастер, что и в предыдущем домашнем опыте). Воспользуемся чашкой, на которую положим бумажный кружок. На­несём пипеткой в центр пятна капли воды.

https://pandia.ru/text/78/355/images/image021_8.jpg" align="left" width="226" height="246 src=">Практические работы" href="/text/category/prakticheskie_raboti/" rel="bookmark">практической работы я познакомилась с различными способами выполнения хроматографии

Хроматография - это метод разделения смесей, основанный на разной скорости движения молекул различных веществ в разных средах. Поэтому молекулы здесь разделяются. Для человечества этот метод позволил совершить качественный скачок вперед, создать в науки новые направления, провести новые исследования, сделать важные открытия, объединяя единомышленников в работе над каждой из проблем.

Литература

1. , «Химия. Вводный курс. 7 класс » Москва. Дрофа.2009г;

2. , . «Химия. Рабочая тетрадь 7 класс» Москва Дрофа.2009г.

3. Хроматография – простой способ анализа сложных веществ (Наука и жизнь. № 2, 1998 г.)

4. Изучение хроматографии на занятиях элективного курса (Химия в школе №5, 2012 г)

Информационная поддержка и Интернет-ресурсы

1.http://adalin. *****/l_01_00/l_01_10d. shtml

2. http://www. *****/art/ch-act/0325.php

3. http://*****/articles/565314/

4. http:///?p=94

5.Фото из личного архива

Метод хроматографии на бумаге относится к плоскостной хроматографии, он основан на распределении анализируемых веществ между двумя несмешивающимися жидкостями.

В распределительной хроматографии разделение веществ происходит вследствие различия коэффициентов распределения компонентов между двумя несмешивающимися жидкостями. Вещество присутствует в обеих фазах в виде раствора. Неподвижная фаза удерживается в порах хроматографической бумаги, не взаимодействуя с ней, бумага выполняет функцию носителя неподвижной фазы.

Виды хроматографической бумаги:

1) гидрофильная бумага удерживает в порах до 22 % воды; неподвижная фаза – вода, подвижная – органический растворитель; такая бумага применяется для определения водорастворимых веществ.

2) гидрофобная бумага отталкивает воду, поэтому ее пропитывают неполярным органическим растворителем (неподвижная фаза); подвижная фаза – вода; такая бумага применяется для определения нерастворимых в воде соединений (жирорастворимые кислоты, витамины).

К хроматографической бумаге предъявляются следующие требования:

¨ химическая чистота;

¨ химическая и адсорбционная нейтральность по отношению к анализируемым веществам и подвижной фазе;

¨ однородность по плотности;

¨ одинаковая направленность волокон.

Для получения хроматограммы на бумагу наносят каплю анализируемой смеси. Бумагу помещают в хроматографическую камеру, ее конец погружают в сосуд с элюентом. Растворитель продвигается по бумаге, смесь анализируемых веществ распределяется между подвижной и неподвижной фазами и разделяется на бумаге в виде пятен или полос. Положение зон компонентов определяют проявлением хроматографической бумаги соответствующими реагентами, которые с компонентами разделяемой смеси образуют окрашенные соединения.

Для количественной оценки способности разделения веществ в хроматографической системе применяют коэффициент распределения К р – отношение концентрации вещества в неподвижной и подвижной фазах. Экспериментальное установление коэффициентов распределения в данном методе невозможно, для оценки способности разделения веществ на бумаге применяют коэффициент смещения (подвижности) R f . Коэффициент смещения равен отношению скорости движения вещества () к скорости движения подвижной фазы (). Экспериментально величину R f находят как отношение расстояния Х, пройденного веществом, к расстоянию Х f , пройденному растворителем от старта до линии фронта:

.

Коэффициент R f изменяется в пределах 0 – 1,00. Величина R f зависит от природы определяемого вещества, вида хроматографической бумаги, качества и природы растворителя, способа нанесения пробы, техники эксперимента и температуры. Коэффициент R f не зависит от концентрации определяемого вещества и присутствия других компонентов.

Идентификацию по хроматограмме выполняют следующими способами:

¨ визуальным сравнением характерной окраски зон веществ на исследуемой и стандартной хроматограммах;

¨ измерением коэффициентов подвижности R f для стандартного и анализируемого вещества в определенном растворителе. Хроматографирование и установление R f для исследуемой и стандартной смесей проводят на одинаковой бумаге и в одной камере в строго идентичных условиях. Сопоставляя коэффициенты R f , делают заключение о присутствии в анализируемой смеси тех или иных компонентов.

Количественное определение выполняют непосредственно по хроматограмме или при вымывании (элюировании) анализируемого вещества с бумаги.

Способы количественного анализа:

¨ визуальное сравнение интенсивности окраски пятен на исследуемой и стандартной хроматограммах (полуколичественное определение, точность 15 –20 %);

¨ измерение площади пятна, образованного данным компонентом, и нахождение концентрации вещества по градуировочному графику, построенному для серии стандартных растворов в координатах: площадь пятна – концентрация вещества; точность определения 5 – 10 %;

¨ элюирование определяемого вещества с поверхности хроматограммы и спектрофотометрическое или флуориметрическое измерение оптической плотности элюата (А); концентрацию вещества в растворе рассчитывают по формуле:

где К – коэффициент пропорциональности; S – площадь пятна, измеренная предварительно, мм 2 ; точность определения 1 %.

По способу хроматографирования различают восходящую (рис. 21), нисходящую (рис. 22), круговую (рис. 23), градиентную и двухмерную хроматографии.

Метод хроматографии на бумаге широко применяется для определения неорганических соединений, аминокислот, аминов, белков, углеводов, жирных кислот, фенолов, витаминов в химической, пищевой, фармацевтической промышленности, медицине, биохимии.

Метод нашел применение в анализе практически всех пищевых продуктов: в сахарном производстве – для определения углеводов; в хлебопекарном и кондитерском – аминокислот, органических кислот, углеводов, полисахаридов и карбонильных соединений; в виноделии – органических кислот и аминокислот; в производстве молока и молочных продуктов – аминокислот; в мясоперерабатывающей промышленности – фенолов, жирных и летучих кислот, аминокислот и карбонильных соединений.